محصول زنوگرفت استخوانی Bone+B یک نوع ماتریکس استخوانی غیرآلی است که به واسطه حذف ترکیبات آلی از استخوان اسفنجی گاو تهیه شده است. برای این منظور، منطبق با روش های دقیق علمی، استخوان های گاوی تحت تیمارهای شیمیایی و حرارتی قرار گرفته به طوریکه تمام محتوی آلی آن از قبیل پروتئین ها، DNA، سلول های خونی و چربی ح ذف شده اما ساختار متخلخل و کریستالی هیدروکسی آپاتایت حفظ شده است. آنالیز میکروسکوپ الکترونی روبشی (SEM) پودر استخوانی Bone+Bتایید کننده ساختار متخلخل این محصول می‌باشد.
زنوگرافت Bone+ B ماتریکس استخوانی غیر آلی است که برای مصارف Periodontal و جراحی های Maxillofacial و Oral تولید شده است. ساختار متخلخل این استخوان غیر آلی از رگزایی و تشکیل استخوان جدید حمایت می کند. این محصول به دو صورت قوطی (جار ) و سرنگی عرضه می شود.
ارزیابی ژنوتوکسیسیتی
هدف: بررسی اثر ژنوتوکسیسیتی Bone +B مواد و روش ها: برای بررسی اثرژنوتوکسیسیتی
Bone+B به روش comet assay، ابتدا محلول نرمال سالین به پودر استخوانی اضافه شده و به مدت یک هفته در دمای ۳۷ درجه نگهداری شد. از محلول عصاره گیری و فیلتر شده به دست آمده برای تیمار سلول های L929 استفاده شد. برای این منظور، سلول های L929 در پلیت های ۲۴ چاهکی کشت شده و با عصاره Bone+B تیمار شدند. از نرمال سالین و هیدروژن پراکساید به ترتیب به عنوان کنترل منفی و مثبت استفاده شد. پس از انکوباسیون پلیت ها به مدت ۳ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد، ۵۰ ماکرولیتر از هر نمونه با ۵۰ ماکرولیتر از آگارز محلول، مخلوط شده و از سوسپانسیون به دست آمده برروی اسلاید مخصوص تست Comet assay، گستره تهیه شد. اسلایدها پس از دو نوبت شستشو توسط 1XTBE، به مدت ۱۰ دقیقه الکتروفورز شده و در نهایت پس از فیکساسیون، خشک شدن و رنگ آمیزی اسلایدها با اتیدیوم بروماید، توسط میکروسکوپ فلورسنت مشاهده شدند.
یافته ها:
نتایج تستcomet assay به صورت میانگین طول دم و سر DNA متعاقب تیمار سلولها توسط عصاره Bone+B اندازه گیری شده و توسط تست های آماری one - way ANOVA، unpaired Student’s tو Dunnet’s post hoc مورد ارزیابی قرار گرفتند.
عصاره Bone+B تغییرات معناداری در مقایسه با گروه کنترل از خود نشان نداد و نتیجه تست Comet assay در مقایسه با گروه کنترل، منفی شد.
نتيجه : با توجه به بخش ۳ از استاندارد ۱۰۹۹۳، ماده آزمون Bone+B فاقد اثر ژنوتوکسیسیتی می باشد.
ارزیابی تب زایی
ارزیابی اثر تب زایی هدف: بررسی اثر تب زایی Bone+B مواد و روش ها: برای بررسی اثر تب زایی
Bone+B ابتدا محلول نرمال سالین به پودر استخوانی اضافه شده و برای مدت ۲۴ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد انکوبه شد.
سپس از محلول فیلتر شده به دست آمده برای تزریق به خرگوش استفاده شد. برای این منظور، یک خرگوش سالم و بالغ انتخاب شده و ۳۰ دقیقه قبل از تزریق عصاره پودر استخوان، دمای بدن خرگوش توسط دماسنج دقیق که درون رکتوم خرگوش به عمق کمتر از5/7 سانتی متر قرار گرفته بود، اندازه گیری شد. این دما به عنوان دمای کنترل در نظر گرفته شد. سپس عصاره فیلتر شده پودر استخوانی از طریق وریدگوش خرگوش به بدنش تزریق شده و دمای بدن خرگوش برای مدت زمان ۱ تا ۳ ساعت پس از تزریق بافواصل زمانی ۳۰ دقیقه ای بررسی و ثبت شد.
يافته ها:
در هیچ یک از نمونه های مورد بررسی، افزایش درجه حرارت رکتال خرگوش ها از حد آستانه تب زایی ( 0/5 درجه سانتی گراد) تجاوز نکرد.
نتيجه :
با توجه به <151 USP< ماده آزمون Bone+B فاقد اثر تب زایی می باشد.
ارزیابی حساسیت زایی هدف: بررسی اثر حساسیت زایی Bone+B
B مواد و روش ها: برای بررسی اثر حساسیت زایی Bone+B
۱۰ موش از گونه NMRI توسط روش MEST، به مدت ۳ الی ۴ روز به صورت (داخل پوستی و اپیدرمی) در معرض ماده آزمون قرار گرفتند. برای انجام تست MEST، ۱۰۰ میکرولیتر از حداقل غلظت تحریکی ماده مورد آزمایش برای ۴ روز متوالی بر روی ناحیه ای از شکم موش به صورت موضعی قرار داده شد و ۱۰ روز پس از تیمار آخر، میزان التهاب و قطر هر دو گوش موش ها در فواصل زمانی ۲۴ الی ۴۸ ساعت پس از انجام آزمایش توسط میکرومتر اندازه گیری شد.
یافته ها: با توجه به حد آستانه برای مثبت در نظر گرفتن پاسخ حساسیت زایی (%۵)، نتایج تست MEST مورد ارزیابی قرار گرفتند. در هیچ یک از نمونه های مورد بررسی افزایش سایز گوش موش ها از آستانه حد پذیرش تجاوز نکرد.
نتيجه : با توجه به بخش ۱۰ از استاندارد ۱۰۹۹۳، ماده آزمون
Bone+B فاقد اثر حساسیت زایی می باشد.
ارزیابی تحریک زایی پوستی
ارزیابی تحریک زایی پوستی هدف: بررسی اثر تحریک زایی پوستی
Bone+B
مواد و روش ها: برای بررسی اثر تحریک زایی Bone+ B ، ۳ گروه ۴ تایی از خرگوش های بالغ به عنوان گروه آزمون، تحت آزمایش به روش های single irritation و repeated irritation قرار گرفتند. برای هر بار انجام تست
، ۴ خرگوش انتخاب شده و ناحیه پشتی سمت راست انتهایی وسمت چپ جمجمه ای خرگوش ها با عصاره حاصل از Bone+B در محلول نرمال سالین تیمارشد. مدت زمان تیمار برای تست single irritation چهار ساعت و برای تست repeated irritation سه روز متوالی در نظر گرفته شد. تحریکات پوستی درجه بندی شده و در دو دسته تشکیل اریتما و زخم بر روی پوست و تشکیل ادم قرار گرفتند. سپس با گذشت ۱، ۲۴، ۴۸ و ۷۲ ساعت پس از تیمار، واکنش های پوستی گروه آزمون مورد ارزیابی قرار گرفت و امتیازات به دست آمده مورد ارزیابی قرار گرفتند.
يافته ها: با توجه به حد آستانه برای مثبت در نظر گرفتن پاسخ تحریکات پوستی ، هیچ یک از نمونه های مورد بررسی، از آستانه حد پذیرش تجاوز نکرد. نتيجه : با توجه به بخش ۱۰ از استاندارد ۱۰۹۹۳، ماده آزمونBone+Bفاقد اثر تحریک زایی می باشد.
ارزیابی سمیت دوزهای مکرر
هدف: بررسی سمیت سیستمیکBone+B
مواد و روش ها:
برای بررسی اثرات سمیت سیستمیک پودر استخوان Bone+B ، از ۴۰ رت سالم، بالغ و با منشا شناخته شده استفاده شد. برای انجام تست، حیوانات به صورت تصادفی ۴ گروه ۱۰ تایی گروه بندی شدند. عملکرد ماده مورد آزمایش ممکن است سبب ایجاد تغییر در میزان آب و غذای مصرفی و وزن بدن حیوانات مورد آزمایش شود. به همین علت، وزن همه حیوانات به صورت انفرادی ۲۴ ساعت قبل از تزریق عصاره Bone+B اندازه گیری شد. تمامی حیوانات یکبار در هفته در طول دوره مدت ۴۵ روزه مطالعه در معرض دوز مناسب ماده مورد آزمایش قرار گرفتند. همچنین در زمان مطالعہ سمیت مکرر دوزها، تغییرات وزن بدن، مشاهدات کلینیکی و پاتولوژی، آسیب های نامطلوب، وزن اندام ها و آسیب های بافتی مورد ارزیابی قرار گرفتند. همچنین حیوانات به صورت روزانه تحت نظر بوده و هرگونه تغییرات رفتاری و بصری در حیوان پس از تزریق دارو، مورد ارزیابی قرار گرفت.
یافته ها:
مدت زمان مطالعہ سمیت سیستمیک بر اساس بخش ۱۱ استاندارد ۱۰۹۹۳، ۴۵ روز در نظر گرفته شده است. به طور کلی دوزی که سبب کاهش وزن ۱۰% یا بیشتر وزن بدن حیوانات شود، دوزسمی نامیده می شود، که پس از گذشت این زمان و با توجه به نتایج به دست آمده، در هیچ یک از حیوانات، تغییر وزن حیوانات به میزان ذکرشده، مشاهده نشد. همچنین در ارزیابی نتایج مشاهدات کلینیکی و پاتولوژی، آسیب های نامطلوب، وزن اندام ها و آسیب های بافتی، هیچ گونه تغییری مشاهده نشد گونه تغییر غیر عادی علائم بالینی و حیاتی پس از مصرف و تزریق ماده مورد آزمایش در حیوانات مشاهده نشد.
نتيجه :
با توجه به بخش ۱۱ از استاندارد ۱۰۹۹۳ و ارزیابی نتایج به دست آمده، ماده آزمون Bone+B فاقد اثر سمیت سیستمیک می باشد.
ارزیابی عملکرد زنوگرافت Bone+B
هدف: بررسی عملکرد
Bone+B در ترمیم آسیب های استخوانی
مواد و روش ها: برای بررسی عملکرد Bone+ B در ترمیم و القا استخوان سازی در محل آسیب بافتی از روش Implantation در مدل ضایعه استخوانی با اندازه مشخص در استخوان جمجمه (Rat calvarial defect)Rat استفاده شد. برای این منظور۴۰ Ratنر بالغ با وزن 250+25grاستفاده و به صورت تصادفی به دو گروه ۲۰تایی تقسیم شد.
Ratها با استفاده از KETAMINE (40MG/KG) , Xylazine (10mg/kg)بیهوش و پس از ایجاد برش بر روی پوست و کنار زدن پرده پری اوستئوم، به وسیله تره فاین یک شکاف دایره ای به قطر ۸ میلی متر و ضخامت ۱ میلی متر بر روی جمجمه ی Rat ها ایجاد شد.
در20Rat محل ضایعه با استفاده ازBone+B پر شد و در 20 Rat دیگر محل ضایعه با نمونه پودر استخوانی خارجی OCS-B به عنوان کنترل گرافت شد.
هفته چهارم و هشتم پس از جراحی، تمامی Rat ها در معرض گاز کلروفرم قرار گرفته و کشته شدند.
پس از مرگ نمونه بافتی از محل implantation تهیه شده و توسط Hematoxylin و Eosin رنگ آمیزی شدند.
یافته ها:
چهار هفته پس از Implantation در هر دو گروه مورد بررسی، در اطراف ناحیه پیوند سلول های استئوبلاست و رگهای تازه شکل گرفته، مشاهده شد.
۸ هفته پس از انجام ایمپلنت، در هر دو گروه مرز بین استخوان میزبان و استخوان تازه شکل گرفته تقریبا به طور کامل از بین رفته است. میزان استخوان تازه تشکیل یافته در هر دو گروه به میزان چشمگیری افزایش یافته است.
نتيجه :
با توجه به بخش ۶ از استاندارد 10993، اگر چه ترمیم استخوان در ناحیه جمجمه پس از ۸ هفته کامل نمیشود و نیازمند زمان بیشتری است ولی نتایج حاصله در این مدت تائید کننده توانایی Bone+B در استخوان سازی و رگ زایی و همچنین شباهت با نمونه مشابه خارجی است.
شرکت نواطب پارس کاملا واقف است که مراقبت از بیمار و منافع او، دلیل اصلی انتخاب یک محصول حرفه ای توسط پزشکان عزیز می باشد. از همین رو این شرکت در تلاش است تا همواره بهترین محصولات Regenerative Biomaterial را به ارمغان بیاورد.
به منظور تضمین کیفیت محصول و انطباق با استاندارد های ملی و بین المللی، شرکت نواطب پارس پروسه تولید Bone+B را تحت دقیق ترین مراحل کنترلی قرار داده و تمام مناطق بحرانی تولید را کنترل می کند.
محصول Bone+B به گونه ای طراحی و تولید شده است که راحت ترین استفاده، بهترین کارایی و بالاترین رضایت پزشکان را فراهم کند و منجر به نتایج احیایی موفق شود.
محصول Bone+B توسط بسیاری از افراد متخصص و حرفه ای مورد ارزیابی قرار گرفته و منجر به کسب رضایت ایشان شده است.